Прямой молекулярный фишинг в лизате клеток HepG2 потенциальных партнеров белок-белковых взаимодействий для белков, кодируемых генами 18-й хромосомы человека [] / П. В. Ершов, Ю. В. Мезенцев, Е. О. Яблоков [и др.] // Биоорганическая химия. - 2019. - Т. 45, № 2. - С. 155-165 : 3 рис., 4 табл. - Библиогр.: с. 163-165 (55 назв. ). - Научная библиотека Дагестанского государственного университета. - code, bioc. - year, 2019. - to, 45. - no, 2. - ss, 155. - ad, 1. - d, 2019, , 0, y. - RUMARS-bioc19_to45_no2_ss155_ad1 . - ISSN 0132-3423
Рубрики: Биология Молекулярная биология Кл.слова (ненормированные): 18-й хромосом человека -- белки -- белок-белковые взаимодействия -- молекулярный фишинг -- поверхностный плазмонный резонанс Аннотация: О выявлении спектра возможных белок-белковых взаимодействий (ББВ) для 6 целевых белков (CYB5A, RAB27B, SMAD4, CXXC1, RNMT, ТТR), кодируемых генами 18-й хромосомы человека, которые имеют определенную медицинскую значимость. Для этого был использован комплексный подход, основанный на совместном применении трех технологий: прямого молекулярного фишинга - аффинной хроматографии, белковой масс-спектрометрии и SPR-анализа (поверхностный плазмонный резонанс, от англ. surface plasmon resonance). В результате из лизата клеточной линии карциномы человека HepG2 было выделено от 1 до 11 потенциальных белков-партнеров для каждого целевого белка. На биосенсоре поверхностного плазмонного резонанса Biacore 3000 были валидированы 10 потенциальных ББВ, для которых были доступны препараты рекомбинантных белков. Для пяти белковых пар (СYB5A/CPR, СYB5A/CYP2C9, СYB5A/CYCS, CPR/СYP2C9 и CXXC1/ CYCS) были получены позитивные результаты, подтверждающие прямое взаимодействие выявленных белков-партнеров с целевыми белками. Для данных ББВ были определены величины равновесных констант диссоциации белковых комплексов (значения K[d] порядка 10{-7}-10{-5} М). Для оценки специфичности выявленных ББВ были протестированы 16 дополнительных различных ББВ с участием целевых белков. Эффективность прямого молекулярного фишинга была оценена на примере цитохрома b5 (CYB5A) как наиболее исследованного из всей выборки целевых белков с точки зрения структурно-функциональных связей с его белками-партнерами. Полученные новые данные расширяют наши знания в области интерактомики белков, кодируемых генами 18-й хромосомы человека, и сокращают количество непроверенных биоинформационных предсказаний возможных ББВ, которые содержатся в доступных Интернет-ресурсах. Доп.точки доступа: Ершов, П. В.; Мезенцев, Ю. В.; Яблоков, Е. О.; Калужский, Л. А.; Флоринская, А. В.; Гнеденко, О. В.; Згода, В. Г.; Вахрушев, И. В.; Раева, О. С.; Ярыгин, К. Н.; Гилеп, А. А.; Усанов, С. А.; Медведев, А. Е.; Иванов, А. С. Нет сведений об экземплярах (Источник в БД не найден) |